上海申安醫療器械廠淺談對金銀花的滅菌,金銀花有抑菌抗炎,抗氧化等多種生理活性,有清熱解毒、治療熱毒血痢、癰疽疔毒的功效。由于忍冬繁殖能力強,對土壤和氣候的選擇并不嚴格,全國各地均有種植,目前在大田生產中主要以扦插和分根繁殖為主。由于近年來金銀花價格走勢不斷上升,運用范圍不斷拓寬,藥農對金銀花的關注度更是增高。植物組織培養是指在無菌環境下,利用植物離體的細胞,組織或器官在人工培養的條件下生成新的植物體的過程。
組織培養能在較短的時間內繁殖出大量的植株,有快速、高效的作用。同時,對于金銀花等容易攜帶病毒,易于退化的植物來說,組織培養可以保持其親本的優良性狀,維持良好品質。在組織培養過程中,面臨的主要問題之一便是外植體的雜菌感染,如何將外植體進行有效的滅菌,從而得到大批量無菌苗,應用于大田生產,得到量大、價低且品質好的金銀花品種是我們一直努力的方向。
由于金銀花外被疏絨毛和疏腺毛,滅菌較為困難。在滅菌劑中加入適量的氫氧化鈉,可增大滅菌劑與金銀花表面的接觸面積,提高滅菌率。在實驗中我們發現,乙醇濃度低,滅菌時間短都可能造成滅菌不徹底,污染率就相應增高,乙醇濃度過高,滅菌時間增長則使外植體褐化率增高,成活率降低,而氫氧化鈉的濃度過高則過分破壞了金銀花表面,使其褐化率增高。處理時間的極差值最高為1.314,為四個因素中最重要因素。本實驗中最適處理時間為30s。實驗五中氫氧化鈉的質量分數為1.0%,處理時間為30s,乙醇的濃度為75.0%,溫度為25℃時外植體污染率和褐化率較低,成活率最高,為最優滅菌方法。
金銀花外植體滅菌方式多種多樣,外被疏絨毛、疏腺毛等特征,使得滅菌方法與其他植物相比有所不同。試劑處理后最佳滅菌方式為濃度75.0%乙醇與質量分數1.0%氫氧化鈉混合形成堿化乙醇處理30s加質量分數0.1%氯化汞處理7min得到污染率5.0%,成活率88.3%的處理方式。考慮到大田生產的成本問題,0.1%的氯化汞處理7min則更為合適。同時,本實驗中最優滅菌方法為在含有納米銀的b型培養基上接種經無菌水沖洗干凈的外植體,可以達到98.7%的滅菌率,96.7%的成活率。隨著科技的發展,試驗水平和儀器設備標準的提升,無菌處理以及組織培養技術將會達到一個更高的水平。
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