上海申安醫(yī)療器械廠發(fā)現(xiàn)甘薯可作為蔬菜或糧食全年種植,尤其以秋冬種植面積最大。甘薯各品種主要依靠無性繁殖,在長期的栽培過程中常因病毒的感染而退化,導(dǎo)致產(chǎn)量和品質(zhì)嚴(yán)重受損。已經(jīng)成為制約甘薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素。利用組織培養(yǎng)技術(shù),快速地生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)無病毒的種苗是甘薯產(chǎn)業(yè)健康可以持續(xù)發(fā)展的重要保障。此外,上海申安醫(yī)療器材廠還發(fā)現(xiàn)大量研究表明,由于次生代謝產(chǎn)物氧化而引起的褐變,以及微生物造成的污染是甘薯的組織培養(yǎng)的兩大難題。甘薯組培苗生產(chǎn)過程中,輕度褐變會影響甘薯初接種外植體生根發(fā)芽效率,嚴(yán)重褐變會直接導(dǎo)致外植體死亡。因此,上海申安醫(yī)療器材廠針對特定地區(qū)的環(huán)境條件和品種,以及組織培養(yǎng)過程中的外植體褐化及微生物污染等關(guān)鍵問題,建立一套相對完善的甘薯再生體系是生產(chǎn)脫毒苗的重要環(huán)節(jié)。
主要儀器
超凈臺(蘇州蘇潔凈化設(shè)備有限公司 SW-CJ-2D),接種器械滅菌器(上海農(nóng)卉生物科技有限公司 NH-JZ-330),壓力滅菌鍋(上海申安醫(yī)療器材廠),分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司 2-16P)。
上海申安LDZF-50L-II立式高壓蒸汽滅菌器
外植體部位、消毒方案、培養(yǎng)基配方以及防褐化劑的選擇是熱帶地區(qū)甘薯主栽品種的再生體系構(gòu)建的關(guān)健技術(shù)環(huán)節(jié)。上海申安本研究表明,不同部位外植體存活率比較中,宜優(yōu)先選擇側(cè)芽和頂芽,最后為莖段。芽作為生長點(diǎn)含有大量生長素等激素類物質(zhì),出芽率會明顯高于莖段。類似的結(jié)果在菊花組織培養(yǎng)中也有體現(xiàn),帶芽莖段作外植體優(yōu)于其它部位。本研究中,甘薯芽的成苗率明顯高于莖段,且側(cè)芽要優(yōu)于頂芽,推測是頂芽的生長素過高,抑制生長導(dǎo)致。
本研究中,甘薯莖段作外植體時存活率波動較大,可能是不同品種甘薯莖段中所含微生物種類不同,導(dǎo)致消毒效、污染率的不同,最終導(dǎo)致了存活率的較大波動。消毒方式的影響實(shí)驗(yàn)中,上海申安在本研究發(fā)現(xiàn)成苗率與消毒劑的濃度及處理時間密切相關(guān),高濃度消毒劑污染程度雖低,但成苗率也不高,過高的消毒劑濃度和過長的消毒時間可損傷植物材料,導(dǎo)致隨后的組培過程中的玻璃化或褐化死亡的情況,宜選用較低濃度的氯化汞與次氯酸鈉聯(lián)合進(jìn)行消毒。